Show simple item record

dc.contributor.advisorEsendağlı, Güneş
dc.contributor.advisorÜnver, Neşe
dc.contributor.authorBilir, Gözde
dc.date.accessioned2022-03-18T08:27:34Z
dc.date.issued2022
dc.date.submitted2022-02-23
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11655/25988
dc.description.abstractMacrophages are the leading cells of innate immunity in the immune response against pathogens and are involved in the regulation of adaptive immune responses. Macrophages with microbicidal properties promote the proinflammatory response by stimulating bacterial products such as LPS, cytokines such as IFN-γ or TNF-α. Production of nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS) is essential in the biochemical mechanism of antimicrobial responses. NO production is provided by nitric oxide synthase (NOS) enzymes. While the existence of the inducible NOS isoform (NOS2) in mouse macrophages has been proven by many studies, there are many conflicting publications on NOS2 expression and NO production level in humans. This thesis is based on the hypothesis that factors produced from basal-like breast cancer cells during monocyte-macrophage transformation can change NOS2 expression and NO during the activation and differentiation processes of myeloid cells. To this end, the THP-1 monocytic cell line was differentiated into macrophage in the presence of basal-like breast cancer cell line supernatants and stimulated with lipopolysaccharide (LPS) and interferon (IFN)-γ. The phenotypic (CD14, TLR4, MD2, CD40, CD11c and IFNγR), functional (ROT and NO production) and morphological (May-Grünwald Giemsa, actin cytoskeleton staining) differentiation parameters in cells were examined. In addition, experiments were performed with fibronectin and Matrigel coated surfaces during differentiation of THP-1 cells under these conditions. Under these conditions, NOS2 expression level was investigated at the mRNA and protein levels. Confirmation experiments were performed in the presence of mouse macrophage and breast cancer cells and in the presence of supplemental human cell lines supernatants. It was determined that ROS and NO production were modulated in THP-1 cells differentiated in the presence of factors secreted from MDA-MB-231 cells used as a human basal-like breast cancer cell line prototype. It was observed that the effect of LPS could be limited in the presence of cancer supernatants, but IFN-γ had a more pronounced effect. It was determined that human NOS2 levels were negatively affected in the presence of breast cancer supernatants and this was also reflected in NO production. The findings indicate that human NOS2 expression and thus NO production can be regulated at transcriptional-translational levels depending on the degree of monocyte- macrophage differentiation, especially in the presence of factors secreted from cancer cells.tr_TR
dc.language.isoturtr_TR
dc.publisherSağlık Bilimleri Enstitüsütr_TR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesstr_TR
dc.subjectMakrofaj, Nitrik Oksit Senaz 2 (NOS2)tr_TR
dc.titleİnsan Makrofajlarında Nitrik Oksit Sentaz 2 (Nos2) İfade ve Aktivitesinin Bazal Benzeri Meme Kanseri Hücrelerinden Üretilen Faktörler Varlığında İncelenmesitr_TR
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesistr_TR
dc.description.ozetMakrofajlar patojenlere karşı immün cevapta doğal immünitenin önde gelen hücreleridir ve kazanılmış bağışıklık cevaplarının düzenlenmesinde rol alırlar. Mikrobisidal özelliğe sahip makrofajlar LPS gibi bakteriyel ürünler, IFN-γ veya TNF-α gibi sitokinlerle uyarılarak proinflamatuvar cevabı ilerletirler. Nitrik oksit (NO) ve reaktif oksijen türleri (ROT) üretimi anti-mikrobiyal yanıtların biyokimyasal mekanizmasında elzemdir. NO üretimi nitrik oksit sentaz (NOS) enzimleri tarafından sağlanır. Uyarılabilir NOS izoformu (NOS2)’nin fare makrofajlarındaki varlığı pek çok çalışma ile kanıtlanmışken, insanlarda NOS2 ifadesine ve NO üretim düzeyine dair pek çok çelişkili yayın bulunmaktadır. Bu tez çalışması, monosit-makrofaj dönüşümü sırasında bazal-benzeri meme kanseri hücrelerinden üretilen faktörlerin miyeloid hücrelerin geçirdiği aktivasyon ve farklılaşma süreçleri sırasında NOS2 ifadesini ve NO değiştirebilmesi hipotezine dayanmaktadır. Bu amaçla, THP-1 monositik hücre hattı, bazal-benzeri meme kanseri hücre hattı süpernatanları varlığında makrofaj yönünde farklılaştırıldı ve lipopolisakarit (LPS) ve interferon (IFN)-γ ile uyarıldı. Hücrelerde fenotipik (CD14, TLR4, MD2, CD40, CD11c ve IFNγR), fonksiyonel (ROT ve NO üretimi) ve morfolojik (May-Grünwald Giemsa, aktin hücre iskeleti boyaması) farklılaşma parametreleri incelendi. Ayrıca, THP-1 hücrelerinin bu koşullarda farklılaştırılması sırasında fibronektin ve Matrijel kaplı yüzeyler ile de deneyler gerçekleştirildi. Bu koşullar altında NOS2 ifade düzeyi mRNA ve protein düzeyinde araştırıldı. Fare kökenli makrofaj ve meme kanseri hücreleri varlığında ve ek olarak kullanılan insan hücre hatları süparnatanları varlığında doğrulama deneyleri gerçekleştirildi. İnsan bazal-benzeri meme kanseri hücre hattı prototipi olarak kullanılan MDA-MB-231 hücrelerinden salgılanan faktörler varlığında farklılaştırılan THP-1 hücrelerinde ROS ve NO üretiminin moldüle olduğu belirlendi. Kanser süpernatanları varlığında LPS’nin etkisinin sınırlanabildiği ancak IFN-γ’nın daha belirgin etkisi olduğu izlendi. İnsan NOS2 düzeylerinin meme kanseri süpernatanları varlığında olumsuz etkilendiği ve bunun NO üretimine de yansıdığı belirlendi. Elde edilen bulgular, özellikle kanser hücresinden salgılanan faktörler varlığında insan NOS2 ifadesinin ve dolayısı ile NO üretiminin monosit-makrofaj faklılaşma derecesine bağlı olarak transkripsiyon-translasyonel düzeylerde düzenlenebileceğine işaret etmektedir.tr_TR
dc.contributor.departmentTemel Onkolojitr_TR
dc.embargo.termsAcik erisimtr_TR
dc.embargo.lift2022-03-18T08:27:34Z
dc.fundingYoktr_TR


Files in this item

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record