dc.contributor.advisor | Tuncel, Süleyman Ali | |
dc.contributor.author | Güngör, Selen Yağmur | |
dc.date.accessioned | 2019-10-21T12:37:17Z | |
dc.date.issued | 2019 | |
dc.date.submitted | 2019-06-19 | |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11655/9413 | |
dc.description.abstract | Silica and magnetic microspheres in the monodisperse porous form used as a
supporting material are synthesized using the multi-step hydrolysis-condensation
method. The surface of magnetic silica microspheres was coated with silica shell.
The gold nanoparticles synthesized by the Turkevich method were immobilized
onto the silica-coated magnetic silica and bare silica microspheres. Surface
morphology and size distribution of the microspheres were analyzed by scanning
electron microscopy (SEM). The surface atomic composition and the chemical
structure were investigated by energy dispersive X-ray spectroscopy (EDX) and
X-ray diffraction method (XRD), respectively. The surface area and the pore size
distribution were determined by using the nitrogen adsorption and desorption
method (BET / Brunauer-Emmett-Teller). The magnetization properties of
magnetic microsphere were investigated using vibrating sample magnetometry
(VSM). The peroxidase-like activity of the synthesized microspheres was
investigated by varying pH, substrate concentration, and the nanozyme
concentration. OPD was used as substrate in the peroxidase-like activity measurements. Measurements were made with UV-visible spectrophotometry.
Lineweaver-Burk graphs were plotted using OPD utilization rate and substrate
concentration values and Michaelis Menten constant (Km) demostrating the
affinity between enzyme and substrate was calculated for nanozym structure. Km
values of gold nanoparticle immobilized silica coated magnetic silica
microspheres and gold nanoparticle immobilized silica microsphere were
calculated as 522,47 μM and 816,48 μM. A biosensor was developed for
glutathione determination based on the variation of peroxidase-like activity of
microsphere depends on glutathione concentation by adsorption glutathione to
the surface of the microsphere. Adsorption of glutathione onto the microsphere
surface was analyzed using High Performance Liquid Chromatography (HPLC).
Glutathione in buffer solution and in human serum were determined using the
synthesized nanozymes under appropriate conditions. The linear change of
adsorbance values corresponding to glutathione concentration was shown, and
the determination of glutathione between 325 - 3253 μM concentration in buffer
medium was performed with gold nanoparticle immobilized silica and silica
coated magnetic silica microspheres. It has been shown that glutathione can be
determined in human serum at concentrations between 2.5-50 μM. | tr_TR |
dc.description.tableofcontents | ÖZET i
ABSTRACT iii
TEŞEKKÜR v
İÇİNDEKİLER vi
ŞEKİLLER DİZİNİ ix
ÇİZELGELER DİZİNİ xiii
SİMGELER VE KISALTMALAR xiv
1. GİRİŞ 1
2. GENEL BİLGİLER 3
2.1. Nanozimler 3
2.2. Manyetik Nanozimler 4
2.3. Peroksidaz Benzeri Aktivite 5
2.4. Peroksidaz Sensörleri 6
2.5. Glutatyon Tayini 7
2.6. Silika Mikroküreler 10
2.7. Manyetik Silika Mikroküreler 11
2.8. Altın Nanopartiküller 12
2.9 Michaelis-Menten Modeli 13
3. DENEYSEL ÇALIŞMALAR 17
3.1. İmmobilize Formda AuNP İçeren ve Peroksidaz Aktivitesine Sahip Monodispers-Gözenekli Mikrokürelerin Sentezi 19
3.1.1. Kullanılan Kimyasal Malzemeler 19
3.1.2. Monodispers Gözenek Yapılı SiO2 ve SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Sentezi 19
3.1.2.1. GMA Polimerinin Sentezi 19
3.1.2.2. Çok Basamaklı Mikrosüspansiyon Polimerizasyon Metodu ile Gözenekli Monodispers Partiküllerin Sentezi 20
3.1.2.3. SiO2 Mikrokürelerin Sentezi 21
3.1.2.4. MagSiO2 Mikrokürelerin Sentezi 22
3.1.2.5. Manyetik Silika Mikrokürelerin Silika ile Kaplanması / SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Sentezi 23
3.1.2.6. SiO2 ve SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin HCl ile Türevlendirilmesi 23
3.1.3. Monodispers ve Gözenek Yapılı SiO2 ve SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin AuNP ile Modifiye Edilmesi 24
3.1.3.1. Aminopropiltrietoksisilan ile Monodispers-Gözenekli SiO2 ve SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Türevlendirilmesi 24
3.1.3.2. AuNP Sentezi 25
3.1.3.3. Monodispers-Gözenekli SiO2 ve SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Altın Nanopartiküller ile Dekorasyonu / Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Oluşturulması 25
3.2. Monodispers-Gözenekli SiO2 ve SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin ve Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Karakterizasyonu 26
3.2.1. Yüzey Alanı ve Gözenek Boyutu Ölçümü 26
3.2.2. Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) 26
3.2.3. Titreşimli Örnek Manyetometri Analizi 27
3.2.4. X Işını Kırınım Yöntemi 27
3.3. Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikroküreler ile Peroksidaz Aktivite Ölçümleri ve GSH Tayini 28
3.3.1. Kullanılan Kimyasal Malzemeler 28
3.3.2. Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Değişen Ortam pH Değerleri için Peroksidaz Aktivitesi Ölçümleri 28
3.3.3. Değişen Substrat Derişimi için Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Peroksidaz Aktivite Ölçümleri 29
3.3.4. Farklı Au@SiO2, Au@SiO2@MagSiO2 Miktarları için Peroksidaz Aktivite Ölçümleri 30
3.3.5. Glutatyonun Au@SiO2, Au@SiO2@MagSiO2 Mikroküre Yüzeylerine Adsorpsiyonunun Ölçülmesi 31
3.3.6. Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin GSH Tayininde Kullanılması 32
3.3.7. Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikroküreler ile İnsan Serumunda GSH Tayini 33
4. SONUÇLAR VE TARTIŞMA 34
4.1. Monodispers-Gözenekli SiO2, SiO2@MagSiO2, Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Karakterizasyonu 34
4.1.1. Monodispers-Gözenekli Mikrokürelerin Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) Görüntüleri 34
4.1.2. Monodispers-Gözenekli Mikrokürelerin Yüzey Alanı ve Gözenek Boyutu Ölçümleri 37
4.1.3. Titreşimli Örnek Manyetometri Analizi 39
4.1.4. X-Işını Kırınım Analizi 40
4.2. İmmobilize Formda AuNP İçeren ve Peroksidaz Aktivitesine Sahip Monodispers-Gözenekli Mikrokürelerin Peroksidaz Aktivitesi Ölçümleri 41
4.2.1. Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Değişen Ortam pH Değerleri için Peroksidaz Aktivitesi Ölçüm Sonuçları 41
4.2.2. Değişen Substrat Derişimi (OPD derişimi) için Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikrokürelerin Peroksidaz Aktivitesi Ölçüm Sonuçları 45
4.2.3. Farklı Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikroküre Miktarları için Peroksidaz Aktivite Ölçümleri 56
4.3. Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Monodispers-Gözenekli Mikroküreler ile GSH Adsorpsiyon Ölçüm Sonuçları 59
4.4. Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikroküreler ile GSH Biyomolekülünün Kolorimetrik Tayini 60
4.4.1. Au@SiO2 ve Au@SiO2@MagSiO2 Mikroküreler ile Çözelti Ortamında GSH Biyomolekülünün Kolorimetrik Tayini 60
4.4.2. Au@SiO2@MagSiO2 Mikroküreler ile İnsan Serumunda GSH Biyomolekülünün Kolorimetrik Tayini 63
5. YORUM 67
6. KAYNAKLAR 69
EKLER 74
EK 1 - Tez Çalışması Orjinallik Raporu 74
ÖZGEÇMİŞ 75 | tr_TR |
dc.language.iso | tur | tr_TR |
dc.publisher | Fen Bilimleri Enstitüsü | tr_TR |
dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | tr_TR |
dc.subject | Nanozim | tr_TR |
dc.subject | Biyosensör | tr_TR |
dc.subject | Silika | tr_TR |
dc.subject | Manyetik silika | tr_TR |
dc.subject | Peroksidaz aktivitesi | tr_TR |
dc.subject | Peroksidaz benzeri aktivite | tr_TR |
dc.subject | ELISA | tr_TR |
dc.subject | Glutatyon | tr_TR |
dc.subject.lcsh | Konu Başlıkları Listesi::Teknoloji. Mühendislik::Kimya mühendisliği | tr_TR |
dc.title | Peroksidaz Aktivitesine Sahip Nanopartikül/Mikroküre Kompozitlerinin Sentezi ve Glutatyon Tayininde Kullanılması | tr_TR |
dc.title.alternative | Synthesis Of Nanoparticle/ Microsphere
Composites With Peroxidase Activity And
Their Use In The Determination Of
Glutathione | tr_eng |
dc.type | info:eu-repo/semantics/masterThesis | tr_TR |
dc.description.ozet | Destek materyali olarak kullanılan monodispers gözenekli formda silika ve
manyetik silika mikroküreler çok basamaklı hidroliz-kondenzasyon yöntemi ile
sentezlenmiştir. Manyetik mikrokürelerin yüzeyi tekrar silika kabuk yapısıyla
kaplanmıştır. Silika ve yüzeyi silika kaplanmış manyetik silika mikrokürelere
Türkevich metodu ile sentezlenen altın nanopartiküller immobilize edilmiştir.
Mikrokürelerin yüzey morfolojileri ve boy dağılımı taramalı elektron mikroskobu
(SEM) ile incelenmiştir. Mikrokürelerin yüzeylerindeki atomik bileşim enerji
saçılımlı X-ışını spektroskopisi (EDX) ile ve kimyasal yapıları X ışını kırınım
yöntemi (XRD) ile incelenmiştir. Mikrokürelerin yüzey alanları ve gözenek boyutu
(BET/Brunauer-Emmett-Teller) azot adsorpsiyon ve desorpsiyon yöntemi
kullanılarak, manyetik özelliğe sahip mikrokürelerin manyetizasyon özellikleri ise
titreşimli örnek manyetometresi (VSM) kullanılarak belirlenmiştir. Sentezlenen
mikrokürelerin peroksidaz benzeri aktivitesi değişen pH, substrat konsantrasyonu ve nanozim miktarı için incelenmiştir. Peroksidaz aktivitesi ölçümlerinde substrat
olarak o-fenilendiamin (OPD) kullanılmıştır. Ölçümler UV-görünür bölge
spektrofotometresi ile gerçekleştirilmiştir. Nanozim yapıları için OPD tüketim hızı
ve substrat derişimi kullanılarak Lineweaver-Burk grafikleri çizilmiş, enzimlerde
enzim ve substrat arasındaki afiniteyi gösteren Michaelis Menten sabiti (Km)
değeri hesaplanmıştır. Yüzeyine altın nanopartikül immobilize edilmiş ve silika ile
kaplanmış manyetik silika mikroküreler için Km değeri 522,47 μM, yüzeyine altın
nanopartikül immobilize edilmiş silika mikroküreler için 816,48 μM olarak
hesaplanmıştır. Glutatyon tayini için geliştirilen sensörde, glutatyonun mikroküre
yüzeyine bağlanmasıyla, mikrokürenin peroksidaz aktivitesinde glutatyon
derişimine bağlı olarak ortaya çıkan değişim incelenmiştir. Glutatyonunun
mikroküre yüzeyine adsorbsiyonu Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi
(HPLC) kullanılarak analiz edilmiştir. Sentezlenen nanozimler ile peroksidaz
aktivitesi için uygun koşullar seçilerek çözelti ortamında ve insan serumunda
glutatyon tayini yapılmıştır. Glutatyon derişimine karşılık gelen adsorbans
değerlerininin lineer değişimi gösterilmiş, altın nanopartikül immobilize edilmiş
silika ve silika ile kaplanmış manyetik silika mikroküreler ile çözelti ortamında 325
- 3253 μM glutatyon tayini yapılmıştır. İnsan serumunda ise 2,5-50 μM arasındaki
derişim değerlerinde glutatyon tayininin yapılabildiği gösterilmiştir. | tr_TR |
dc.contributor.department | Kimya Mühendisliği | tr_TR |
dc.embargo.terms | Acik erisim | tr_TR |
dc.embargo.lift | 2019-10-21T12:37:17Z | |