| dc.contributor.advisor | AERTS KAYA, Fatima S.F. | |
| dc.contributor.author | AYDIN, Gözde | |
| dc.date.accessioned | 2018-08-10T06:01:44Z | |
| dc.date.available | 2018-08-10T06:01:44Z | |
| dc.date.issued | 2018 | |
| dc.date.submitted | 2018-07-10 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11655/4757 | |
| dc.description.abstract | Mesenchymal Stem Cells (MSCs) are multipotent cells with self-renewal ability and form the basis for regenerative treatments. CD271 antigen is an effective marker for isolation of pure populations of MSCs from bone marrow (BM). Within this thesis, the efficacy of CD271 in the isolation of MSCs from BM was assessed, cells were characterized with respect to their colony forming capacity, immunophenotype, proliferative and differentiation capacities and compared to plastic adherent BM-MSCs. In addition, the use of CD271 for isolation of MSCs from fetal tissues was assessed. Functional and lymphohematopoietic support of BM-derived MSCs and CD271 + stem cells and expression of NOTCH receptors and ligands was examined to understand their role in in vitro lymphohematopoietic differentiation. Although the CD271 was expressed at very low levels, CD271 + stem cells contained all colony forming capacity of the BM. These cells showed similar immunophenotypes and differentiation profiles, cytokine release, NOTCH receptor and ligand expression, as well as support of ex vivo hematopoietic cell expansion in comparison to BM-MSCs. However, the CD271 antigen could not be used for isolation of pure MSC populations from fetal tissues. Therefore; different isolation and/or culture conditions must be optimized for the purification of MSCs from placenta chorion (PC), placental amnion (PA) and umbilical cord (UC). CD271 + stem cells and BM-MSCs showed similar cytokine secretion and NOTCH receptor and ligand expression. However, while the profile of MSCs isolated from fetal tissues displayed high similarities, they were clearly distinct from BM-MSCs and BM-CD271+ stem cells. The importance and implications of these differences, which may have great importance for their clinical use, as well as effects on the ex vivo expansion of hematopoietic stem cells (HSCs) and lymphohematopoietic differentiation are discussed in this thesis. | en |
| dc.description.tableofcontents | ONAY SAYFASI iii
YAYIMLAMA VE FİKRİ MÜLKİYET HAKLARI BEYANI iv
ETİK BEYAN v
TEŞEKKÜR vi
ÖZET vii
ABSTRACT viii
İÇİNDEKİLER ix
SİMGELER ve KISALTMALAR xiv
ŞEKİLLER xvi
TABLOLAR xix
1. GİRİŞ 1
2. GENEL BİLGİLER 5
2.1. Mezenkimal Kök Hücre Terminolojisi ve Tarihçesi 5
2.2. Mezenkimal Kök Hücre Belirteçleri ve Tanımı 6
2.3. Mezenkimal Kök Hücre Kaynakları 8
2.4. Mezenkimal Kök Hücrelerin İmmünomodülatuar Etkileri 9
2.5. Mezenkimal Kök Hücrelerin Hematopoetik Desteği 11
2.6. Kemik İliğinden Mezenkimal Kök Hücrelerin Prospektif İzolasyonu 12
2.6.1. STRO Antikorları 13
2.6.2. CD105 13
2.6.3. CD73 14
2.6.4. Stage-Specific Embriyonik Antijenler 14
2.6.5. D7-FIB 14
2.6.6. GD2 15
2.6.7. CD146 15
2.6.8. CD271 15
2.7. CD271 Geni ve Reseptörü 16
2.7.1. CD271 Antijeninin Organizmadaki Rolü 18
2.7.2. CD271 Antijeninin Dokulardaki Dağılımı 19
2.7.3. CD271+ Kök Hücre Özellikleri ve In Vivo Lokalizasyonu 20
2.8. Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücreleri 21
2.8.1. Plasenta 22
2.8.2. Göbek Kordonu 23
2.9. Hematopoetik Kök Hücreler 24
2.9.1. Hematopoez 24
2.9.2. Ex Vivo Hematopoetik Kök Hücre Çoğaltılması 27
2.9.3. Mezenkimal Kök Hücre/Hematopoetik Kök Hücre Ko-Kültürleri 27
2.10. Notch Reseptörleri, Ligandları ve Sinyalizasyonu 29
2.10.1. Hematopoezde Notch Sinyalizasyonunun Önemi 31
2.10.2. Lenfopoezde Notch Sinyalizasyonunun Önemi 31
2.10.3. In Vitro Lenfopoezi Destekleyen Hücre Hatları 32
2.11. Hipotez 33
2.12. Tez Çalışmasının Amaçları 35
3. GEREÇ VE YÖNTEM 37
3.1. Materyaller 37
3.1.1. İnsan Materyalleri 37
3.1.2. Hücre Hatları 37
3.2. Hücre İzolasyonu 38
3.2.1. Kemik İliği Mononükleer Hücre İzolasyonu 38
3.2.2. Kordon Kanından Monunükleer Hücre İzolasyonu 38
3.2.3. Kemik İliğinden Plastiğe Aderan Mezenkimal Kök Hücre Kültürü 39
3.2.4. İnsan Kemik İliğinden CD271+ Kök Hücre İzolasyonu ve Kültürü 39
3.2.5. Koloni Oluşturan Ünite-Fibroblastik Deneyi 40
3.2.6. Fetal Doku Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu 41
3.2.7. Kordon Kanından CD34+ Hematopoetik Kök Hücre İzolasyonu 42
3.3. Hematopoetik Kök Hücre Koloni Oluşturan Birim Deneyleri 44
3.4. CD34+ Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücre Kültürü ve Ko-Kültürleri 44
3.5. B ve T Hücre Farklılaşma Deneyleri 44
3.6. Hücrelerin Proliferasyon Takibi 45
3.7. Hücre Dondurulması ve Çözdürülmesi 46
3.8. Mezenkimal Kök Hücrelerin Farklılaşma Deneyleri 47
3.9. Hücre Sayımı 48
3.10. Hücrelerin İmmünofenotiplendirilmesi 48
3.11. Kantitatif Gerçek Zamanlı PCR (qRT-PCR) 49
3.11.1. RNA İzolasyonu ve RNA Kantifikasyonu 49
3.11.2. cDNA Sentezi 51
3.11.3. qRT-PCR 52
3.12. Multipleks Sitokin-Array 54
3.13. ELISA 54
3.14. Western Blot 55
3.14.1. Protein İzolasyonu 55
3.14.2. Bradford Assay 56
3.14.3. Poliakrilamid Jelin Hazırlanması ve Örneklerin Yüklenmesi 56
3.14.4. Protein Transferi 57
3.14.5. İmmün İşaretleme 58
3.14.6. Elektroforez Sonrası Jellerin Coomassie Blue ile Boyanması 58
3.17. NSGW41 Farelere Hematopoetik Kök Hücre Nakli 59
3.18. Mikoplazma Testleri 60
3.19. İstatiksel Yöntemler 60
3.20. Kimyasallar, Besiyeri, Tampon ve Solüsyonlar 61
4. BULGULAR 70
4.1. Kemik İliğinden Mezenkimal Kök Hücre ve CD271+ Kök Hücrelerin İzolasyonu, Üretilmesi ve Karakterizasyonu 70
4.1.1. Kemik İliği CD271+ Kök Hücrelerin Koloni Oluşturma Kapasitesi Yüksektir 70
4.1.2. Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelerin ve CD271+ Kök Hücrelerin Farklılaşma Kapasitesi Benzerdir 73
4.1.3. Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler ve CD271+ Kök Hücreler Benzer İmmünofenotip Göstermektedir 75
4.1.4. Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelerin ve CD271+ Kök Hücrelerin Proliferasyon Hızı Benzerdir 76
4.1.5. NGF, Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelerin ve CD271+ Kök Hücrelerin Proliferasyon Hızını Etkilememektedir 76
4.1.6. Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler ve CD271+ Kök Hücreler Benzer NOTCH Reseptör ve Ligand Gen Profili Göstermektedir 77
4.1.7. Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler ve CD271+ Kök Hücreler Benzer Sitokin Profili Göstermektedir 79
4.1.8. Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler ve CD271+ Kök Hücreler, CD34+ Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücre Çoğalmasını Desteklemektedir 81
4.1.9. CD271+ Kök Hücreler ile Ko-Kültür Yapılarak Çoğaltılan CD34+ Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücreler In Vitro B/T Hücre Farklılaşma Potansiyeli Göstermektedir 85
4.2. Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu, Üretilmesi ve Karakterizasyonu 87
4.2.1 Fetal Doku CD271+ Hücrelerin CFU-F Kapasitesi Yoktur 87
4.2.2. Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücrelerin Farklılaşma Potansiyeli Düşüktür 88
4.2.3. Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücre Kültürleri Heterojen Hücre Popülasyonlarından Oluşmaktadır 90
4.2.4. Kemik İliği ve Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücrelerinin İmmünomodülatuar Molekül İfadeleri 92
4.2.5. Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücrelerin Proliferasyon Hızı Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelerden Yüksektir 93
4.2.6. Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücreler, Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelere Göre Yüksek Oranda IL-8 Salgılamaktadır 94
4.2.7 Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücrelerin NOTCH ve JAG İfadeleri Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelere Göre Daha Düşüktür 96
4.2.8. Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelerde ve CD271+ Kök Hücrelerde NOTCH1 ve NOTCH3 Protein İfadeleri Benzerdir 98
4.2.9. NSGW41 Fare Deneyi In Vivo Sonuçları 98
4.2.10. Mikoplazma ve Endotoksin Testleri Sonuçları 99
5. TARTIŞMA 100
5.1. CD271 Antijeni Kemik İliğinden Saf Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonunda Kullanılabilmektedir 100
5.2. CD271 Antijeninin Fetal Dokulardan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonundaki Önemi 102
5.3. Fetal Doku Mezenkimal Kök Hücrelerin Özellikleri Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelerden Önemli Farklılıklar Göstermektedir 104
5.4. Mezenkimal Kök Hücrelerin, Hematopoetik Kök Hücrelerin İdamesinde, Çoğaltılmasında ve Farklılaşmasındaki Önemi 108
5.5. Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler ile CD271+ Kök Hücrelerin ve Fetal Mezenkimal Kök Hücrelerin In Vitro Lenfopoezi Destekleme Potansiyeli 110
6. SONUÇ 113
7. KAYNAKLAR 118
8. EKLER
EK 1. Tez Çalışması İle İlgili Etik Kurul İzinleri
9. ÖZGEÇMİŞ | tr_TR |
| dc.language.iso | tur | tr_TR |
| dc.publisher | Sağlık Bilimleri Enstitüsü | tr_TR |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | tr_TR |
| dc.subject | CD271 | tr_TR |
| dc.subject | Mezenkimal Kök Hücre | |
| dc.subject | Hematopoetik Kök Hücre | |
| dc.subject | Fetal dokular | |
| dc.subject | Kemik iliği | |
| dc.title | Değişik Kaynaklı MKH’lerin Detaylı Karakterizasyonu, Lenfohematopoezi Destekleyici Özellikleri ve İzolasyonunda CD271 Antijeninin Önemi | tr_TR |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | en |
| dc.description.ozet | Mezenkimal Kök Hücreler (MKH), kendini yenileyebilen multipotent hücrelerdir ve rejeneratif tedavilerin temelini oluşturmaktadır. CD271 antijeni, kemik iliğinden (Kİ) saf MKH izolasyonu için kullanılan en etkin belirteçtir. Bu tez kapsamında; CD271 antijeni kullanılarak insan Kİ’nden MKH izolasyonu ve karakterizasyonu yapılmıştır; plastiğe aderan Kİ-MKH ve CD271+ kök hücrelerin (KH), koloni oluşturma kapasitesi, immün profili, proliferatif ve farklılaşma kapasiteleri kıyaslanmıştır. Ayrıca CD271 antijeninin, fetal dokulardan saf MKH izolasyonu için kullanılıp kullanılamayacağı araştırılmıştır; Kİ-kaynaklı MKH ve CD271+ KH’lerin fonksiyonu ve lenfohematopoetik desteği karşılaştırılmıştır; lenfohematopoetik farklılaşmasına desteğini anlamak için NOTCH reseptör ve ligandların ifadelerine bakılmıştır. CD271 antijeni düşük oranlarda Kİ’nde ifade edilse de, CD271+ KH’ler; Kİ’nin tüm koloni oluşturma kapasitesine sahip ve aderan Kİ-MKH’ler ile benzer bir immünofenotip, farklılaşma profili, sitokin salınımı ve NOTCH reseptör ve ligand ifadeleri göstermekte olup, benzer şekilde hematopoetik hücre desteğini sağlamaktadır. Ancak, CD271 antijeni Kİ’nden saf MKH’lerin izolasyonunda kullanılabilirken, fetal dokulardan saf MKH izolasyonu için kullanılamamaktadır. Bu sebeple; plasenta koryon (PK), plasenta amniyon (PA) ve göbek kordonundan (GK) MKH saflaştırılması için farklı izolasyon ve/veya kültür koşullarının optimizasyonu gerekmektedir. Medyuma salınan sitokin profiline ve NOTCH reseptör ile ligand ifadelerine bakıldığında, CD271+ KH’ler ve Kİ-MKH’ler birbirine yakındır. Ancak, fetal dokulardan izole edilen MKH’lerin profilleri birbirine yakın iken, Kİ’nden izole edilen MKH’lerden belirgin farklar göstermektedir. Bu farklar; ex vivo Hematopoetik kök hücre’lerin (HKH) çoğaltılması ve lenfohematopoetik farklılaşmaya olan desteği bakımından büyük önem taşıdığı için, klinik açıdan tartışılmıştır. | tr_TR |
| dc.contributor.department | Kök Hücre | tr_TR |
