Basit öğe kaydını göster

dc.contributor.advisorDenizli, Adil
dc.contributor.authorHüseynli, Sabina
dc.date.accessioned2018-02-12T06:01:39Z
dc.date.available2018-02-12T06:01:39Z
dc.date.issued2017-01-19
dc.date.submitted2018-01-05
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11655/4273
dc.description.abstractAlbumin, composed of a single chain of 585 amino acids, is synthesized in the liver. It is the most common protein found in blood plasma of humans and other mammals. It constitutes 60% of the proteins found in blood. It is also found in tissue fluids, especially in muscle and in the skin, small amounts in tears, sweat, stomach juices and in the gall. 30-40% of the total albumin in the body is in the blood. The most important function is to balance the water between the blood and the tissue fluids, as well as to keep the fat acids and various other substances moving. Albumin is carrier protein that organizes oncotonic pressures in the body and provides inter-tissue substance transport. In affinity chromatography, the interaction of the corresponding antibodies with antigens, enzymes with substrate anologues and receptors of hormones is the type of interaction. Immunoaffinity chromatography, a type of affinity chromatography, is a chromatographic technique frequently used in recent years. Antibodies used as ligands in immunoaffinity chromatography are used for the purification of antigens. In this work, cryogel columns immobilized Fab fragments were prepared for human serum albumin (HSA) purification. For this purpose, firstly enzymatic hydrolysis of anti human serum albumin (Anti-HSA) molecules with papain enzyme was performed and the resulting Fab fragments were immobilized in the cryogel column. For control purposes, Fab fragment immobilized PHEMAC cryogel column was prepared. Characterization studies of prepared columns (SEM, BET, FTIR-ATR swelling) were performed. The effect of various parameters (pH scanning, concentration, flow rate, etc.) on the albumin purification process was examined. Albumin selectivity depends on changes in the Fab region. Thus, instead of immobilizing the whole of the molecule, the functional Fab region responsible for antigen binding is immobilized. Thus, both the immobilization process is facilitated and the efficiency of the column is increased. PHEMA-based cryogels are biocompatible with proteins. In this study, HSA purification was carried out selectively from aqueous solution.tr_TR
dc.language.isoentr_TR
dc.publisherFen Bilimleri Enstitüsütr_TR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesstr_TR
dc.subjectKriyojel, İmmunoafinite Kromatografisi, İnsan Serum Albümini, Anti İnsan Serum Albümini.tr_TR
dc.titlePreparation of Fab Fragment Immobilized Immunoaffinity Cryogels and Albumın Purificationtr_TR
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesistr_TR
dc.description.ozet585 aminoasitli tek bir zincirden oluşan albümin karaciğerde sentez edilir. İnsan ve diğer memeli hayvanların kan plazmasında bulunan en yaygın proteindir. Kanda bulunan proteinlerin %60'ını oluşturur. Ayrıca, doku sıvılarında, özellikle kas ve deride, az miktarda gözyaşı, ter, mide suları ve safrada da bulunur. Vücuttaki toplam albüminin %30-40'ı kandadır. Yağ asitleri ve çeşitli başka maddeleri kanda taşımasının yanı sıra en önemli işlevi, kan ile doku sıvıları arasında suyun dengelenmesini sağlamaktır. Albumin kandaki onkotik basıncı düzenleyen ve dokular arası madde alışverişini sağlayan taşıyıcı proteindir. Afinite kromatografisinde söz konusu etkileşim antikorların antijenlerle, enzimlerin substrat anologlarıyla ve de hormonların reseptörleri ile olan etkileşimleri türündendir. Afinite kromatografisinin bir çeşidi olan immunoafinite kromatografisi son yıllarda sıklıkla kullanılan kromatografik bir tekniktir. İmmunoafinite kromatografisinde ligand olarak kullanılan antikorlar antijenlerin saflaştırılmasında kullanılır. Bu çalışma kapsamında insan serum albümin (HSA) saflaştırılması için Fab fragmenti immobilize edilmiş kriyojel kolonlar hazırlanmıştır. Bu amaçla öncelikle anti insan serum albümini (Anti-HSA) moleküllerinin papain enzimi ile enzimatik hidrolizi gerçekleştirilmiş ve bunun sonucunda elde edilen Fab fragmenti kriyojel kolon içerisine immobilize edilmiştir. Kontrol amaçlı Fab fragmenti immobilize edilmemiş PHEMAC kriyojel kolonu da hazırlanmıştır. Hazırlanan kolonların karakterizasyon çalışması (SEM, BET, FTIR-ATR, şişme) yapılmıştır. Daha sonra albümin saflaştırılması işleminde çeşitli parametrelerin (pH taraması, derişim, akış hızı vs.) etkisi incelenmiştir. HSA seçiciliği Fab bölgesindeki değişimlere bağlı olduğu için, molekülün bütününü immobilize etmektense antijen bağlanmasından asıl sorumlu olan işlevsel Fab bölgesi immobilize edilmiştir. Bu sayede hem immobilizasyon işlemi kolaylaştırılmış, hem de kolonun etkinliği arttırılmıştır. PHEMA temelli kriyojeller proteinlerle biyouyumluluk göstermektedir. Çalışma kapsamında sulu çözeltiden seçici bir şekilde HSA saflaştırılması gerçekleştirilmiştir.tr_TR
dc.contributor.departmentKimyatr_TR
dc.contributor.authorID10178095tr_TR


Bu öğenin dosyaları:

Bu öğe aşağıdaki koleksiyon(lar)da görünmektedir.

Basit öğe kaydını göster