| dc.contributor.advisor | Kır, Sedef | |
| dc.contributor.author | ÖZKAN, Ece | |
| dc.date.accessioned | 2017-07-18T07:59:10Z | |
| dc.date.available | 2017-07-18T07:59:10Z | |
| dc.date.issued | 2017-07-14 | |
| dc.date.submitted | 21-06-20 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11655/3715 | |
| dc.description.abstract | Down Syndrome is a common genetic disorder arising due to the condition that humans having an additional chromosome within 21st chromosome couple. Metabolomics is identification and quantification of small molecule metabolites (molecular weight <1000 Da) presence in tissues, cells and physiological fluids within a certain period of time and determining their amounts. Metabolites are midproducts of biochemical reactions and take part in bonding metabolic paths, each different than each other, occuring in living cell. Considered to be differentiators of early diagnosis of Down Syndrome, 2-Hydroxybutyric acid, 3-Hydroxybutyric acid, β-Hydroxyisovaleric acid, Urasil, Glutamic acid, Maltose and Melezitose metabolites were chosen. Analysis of the metabolites were conducted by GC-MS method using %5 phenyl %95 dimethylpolisiloxan (30 m × 0,25 mm, 0,25 μm) capillary column, at 60oC (1 min), 10oC min-1 with 200oC and 30oC min-1 with 320oC 6 min oven temperature program, as helium mobile phase and flow rate of 2,80 mL min-1 and adding myristic acid-d27 as internal standard. Developed method was validated by parameters of stability, selectivity, linearity, accuracy, precision, repeatabilty, sensitivity, robustness, ruggedness and system compatibility. Developed and validated method was applied to plasma samples taken from pregnants diagnosed with Down Syndrome and healthy pregnants and found to be statistically different. | en |
| dc.description.tableofcontents | ONAY SAYFASI iii
YAYIMLAMA VE FİKRİ MÜLKİYET HAKLARI BEYANI iv
ETİK BEYAN v
TEŞEKKÜR vii
ÖZET viii
ABSTRACT ix
İÇİNDEKİLER x
SİMGELER VE KISALTMALAR xiii
ŞEKİLLER xvi
TABLOLAR xviii
1.GİRİŞ 1
2.GENEL BİLGİLER 3
2.1. Down Sendromu 3
2.2. Metabolomik Analizler 4
2.3. Metabolitler 5
2.3.1. 2-Hidroksi bütirik asit (α-Hidroksi Bütirik Asit) (2-HB) 5
2.3.2. 3-Hidroksi bütirik asit (β-Hidroksi Bütirik Asit) (3-HB) 6
2.3.3. β-Hidroksi İzovalerik Asit (3-Hidroksi İzovalerik Asit) (β-HIVA) 7
2.3.4. Urasil (URA) 7
2.3.5. Glutamik asit (GLU) 8
2.3.6. Maltoz (MAL) 10
2.3.7. Melezitoz (MEL) 10
2.4. Seçilen Metabolitlerin Gaz Kromatografisi ile Analizleri 13
2.5. Kromatografi 22
2.5.1. Kromatografi Türleri 22
2.5.2. Kromatografik Parametreler 24
2.6. Gaz Kromatografisi-Kütle Spektroskopisi (GC-MS) 30
2.6.1. Gaz Kromatografisi (GC) 31
2.6.2. Kütle Spektroskopisi (MS) 41
2.6.3. Türevlendirme Teknikleri 48
2.6.4. Numune Hazırlama 51
2.6.5. Sistem Uygunluk
2.6.6. Analitik Yöntem Validasyonu
52
52
3. DENEYSEL KISIM 58
3.1. Kullanılan Cihazlar 58
3.2. Kullanılan Kimyasal Maddeler 58
3.3. Kullanılan Cam ve Sarf Malzemeler 59
3.4. Stok Çözeltilerin Hazırlanması 60
3.5. Etik Kurul İzni 62
3.6. Plazma Numunelerinin Alınması ve Saklanması 62
3.7. Analiz Yöntemi 62
3.7.1. Protein Çöktürmesi 62
3.7.2. Türevlendirme 62
3.7.3. Kromatografik Koşullar 63
3.8. Sistem Uygunluk Testi (SUT) 63
3.9. Yöntem Validasyonu 64
3.9.1. Kararlılık 64
3.9.2. Özgünlük (Seçicilik) 65
3.9.3. Doğrusallık 65
3.9.4. Doğruluk 65
3.9.5. Kesinlik 65
3.9.6. Duyarlılık (Gözlenebilme ve Alt Tayin Sınırı) 66
3.9.7. Sağlamlık ve Tutarlılık 66
3.10. Geri Kazanım 66
3.11. Yöntemin Gerçek Numunelere Uygulanması 67
3.12. Kalite Kontrol Kartları 68
3.13. İstatistiksel Hesaplamalar 68
4. BULGULAR 69
4.1. Türevlendirme Basamağının Optimizasyonu 69
4.2. Kromatografik Yöntem Koşullarının Optimizasyonu 77
4.3. Protein Çöktürme Basamağının Optimizasyonu 77
4.4. Sistem Uygunluk Çalışması 78
4.5.Yöntem Validasyonu 78
4.6. Yöntemin Gerçek Numunelere Uygulanması 96
4.7. Kalite Kontrol Kartları 99
5. TARTIŞMA 101
6. SONUÇ VE ÖNERİLER 108
7. KAYNAKLAR 110
8. EKLER 118
EK 1. Etik Kurul İzni
EK 2. İstatistiksel Katsayıların Hesaplanması
9. ÖZGEÇMİŞ 120 | tr_TR |
| dc.language.iso | tur | tr_TR |
| dc.publisher | Sağlık Bilimleri Enstitüsü | tr_TR |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | tr_TR |
| dc.subject | Down Sendromu | tr_TR |
| dc.subject | Metabolomiks | |
| dc.subject | Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrometrisi | |
| dc.title | Down Sendromunun Tanısına Yönelik Seçilmiş Metabolitlerin Gaz Kromatografisi Kütle Spektrometrisi ile Tayini | tr_TR |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/masterThesis | en |
| dc.description.ozet | Down Sendromu, genetik düzensizlik sonucu insanın 21. kromozom çiftinde fazladan bir kromozom bulunması durumundan ortaya çıkan yaygın bir genetik bozukluktur. Metabolomik; belirli bir zaman diliminde dokularda, hücrelerde ve fizyolojik sıvılarda küçük moleküllü metabolitlerin (moleküler ağırlığı <1000 Da) tanımlanması ve miktarlarının belirlenmesidir. Metabolitler, biyokimyasal reaksiyonların ara ürünleridir ve canlı hücre içerisinde gerçekleşen birbirinden farklı birçok yolağın bağlanmasında rol alırlar. Tez çalışmasında Down Sendromunun erken tanısında ayırıcı olduğu düşünülen 2-hidroksi bütirik asit, 3-hidroksi bütirik asit, β-hidroksi izovalerik asit, Urasil, Glutamik asit, Maltoz ve Melezitoz metabolitleri seçilmiştir. Söz konusu metabolitlerin analizleri %5 difenil %95 dimetilpolisiloksan (30 m × 0,25 mm, 0,25 μm) kapiler kolon ile 60oC (1 dk), 10oC dk-1 ile 200oC sonra 30oC dk-1 ile 320oC (6 dk) fırın sıcaklık programında, hareketli faz olarak helyum ve akış hızı 2,80 mLdk-1 ve iç standart olarak miristik asit-d27 kullanılarak GC-MS yöntemi ile yapılmıştır. Geliştirilen yöntem, kararlılık, özgünlük, doğrusallık, doğruluk, kesinlik, tekrarlanabilirlik, duyarlılık, sağlamlık, tutarlılık ve sistem uygunluk parametreleri değerlendirilerek valide edilmiştir. Geliştirilen ve valide edilen yöntem Down Sendromu tanısı konmuş hasta gebe ve sağlıklı gebelerden alınan plazmalara uygulanmış ve istatistiksel açıdan farklılaşmanın olduğu bulunmuştur. | tr_TR |
| dc.contributor.department | Kimya | tr_TR |
