Basit öğe kaydını göster

dc.contributor.advisorÇelebier, Mustafa
dc.contributor.authorŞakar, Fırat
dc.date.accessioned2019-10-21T12:27:56Z
dc.date.issued2019
dc.date.submitted2019-06-11
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11655/9360
dc.description.abstractProteome; derived from the combination of protein and genome words, is a word that covers all the proteins encoded by a particular genome. Proteome analysis is called proteomics. An organism has different protein expressions in different parts of the body, at different stages of the cell cycle, and in different environmental conditions. Unlike the genome, which is a stable structure and well-defined for an organism, the proteome differs from cell to cell and is in constant change through biochemical interactions in response to internal and external stimuli. Amphiphilic cyclodextrins are molecules capable of selfforming nanoparticles. Also; these molecules were found to have an apoptotic effect intrinsically on some cancer cell lines. Due to the properties it has shown, these structures have entered the literature as a drug delivery system at nano scale. In this study, the anticancer mechanism of PBO coded amphiphilic cyclodextrin nanoparticle on HEPG-2 liver cancer cells was determined by expressional proteomic approaches. Cancer cell lines that prevent proliferation by the effect of amphiphilic cyclodextrin nanoparticles were used as treated cell lines and named as T group; the group in which the proliferation was not prevented without being treated in any way was used as the control group and was named as the C group. Cytosolic fractions were obtained from the lysate solution taken from T and C groups. In proteomic studies, two-dimensional gel iv electrophoresis (2D gel electrophoresis) was performed for determination of the over or under expressed proteins belonging to T and C groups. According to the results of image analysis, the proteins found to be differentiated for T and C groups were identified by Matrix Assisted Laser Ionization Mass Spectrometry (MALDI-TOF / TOF-MS). In this study, amphiphilic cyclodextrin nanoparticles, which are used as drug delivery systems, have been shown to be effective on liver cancer alone with changes in proteome level. In cases where amphiphilic cyclodextrin nanoparticles are used as drug delivery system in cancer treatment, the effect of the nanoparticle itself on suppressing cell proliferation should not be ignored.tr_TR
dc.description.tableofcontents1. GİRİŞ ve AMAÇ ........................................................................................................ 1 2. GENEL BİLGİLER .................................................................................................... 5 2.1. Bilim ve Teknolojinin Nanoteknolojinin Gelişimi Üzerine Etkisi ....................... 5 2.1.1. Bilim ve Teknolojinin Gelişiminden Nanoteknolojinin Günlük Hayatımıza Girişine Uzanan Kronolojik Tarih ............................................. 5 2.2. Nanoteknoloji ....................................................................................................... 7 2.3. Nanotıp ................................................................................................................. 7 2.3.1. Nanoteknolojinin Tıptaki Kullanım Alanları ................................................ 9 2.3.2. İlaç Taşıyıcı Sistemler ................................................................................... 9 2.3.3. Nanopartiküller ............................................................................................ 11 2.4. Gen, Protein, Genom ve Proteom Tanımı .......................................................... 13 2.4.1. Genomikten Proteomiğe .............................................................................. 18 2.5. Proteomik Çalışmalar ......................................................................................... 20 2.5.1. Proteomik Teknolojisi ................................................................................. 21 2.6. Protein Ayırma Yöntemleri ................................................................................ 21 2.7. İki Boyutlu Jel Elektroforez ............................................................................... 23 2.7.1. Numune Hazırlama ve IPG Şeritlere Protein Yüklenmesi .......................... 24 2.7.2. İzoelektrik Odaklama (IEF) ......................................................................... 25 2.7.3. Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamid Jel Elektroforez ............................... 27 2.7.4. Protein Analizinde Renklendirme ............................................................... 29 2.7.5. İmaj Görüntüleme ........................................................................................ 29 2.7.6. Proteinlerin Jelden Uzaklaştırılması ............................................................ 31 2.7.7. Proteinlerin Peptidlere Parçalanması ve Peptid Dizileme ........................... 32 2.8. Kütle Spektrometresi .......................................................................................... 33 viii 2.8.1. MALDI-TOF/TOF Kütle Spektrometresi ................................................... 34 2.8.2. ESI-TOF Kütle Spektrometresi ................................................................... 35 2.9. Biyoinformatik ................................................................................................... 36 2.10. Kanser Tedavisinde Proteomik Yaklaşımlar ...................................................... 36 2.11. Karaciğer Kanseri ............................................................................................... 37 3. GEREÇ ve YÖNTEM ............................................................................................... 39 3.1. Gereçler (Kullanılan Kimyasallar, Araç ve Gereçler, Yazılımlar, Veritabanları, Hazır/lanan Tamponlar-Çözeltiler) ............................................. 39 3.1.1. Tez Çalışmasında Uygulanan Genel Metodoloji ......................................... 40 3.1.2. Hücre Kültürü Çalışmaları ........................................................................... 41 3.1.3. Numune Hazırlama ve Protein Miktar Tayini ............................................. 41 3.2. Yöntem ............................................................................................................... 49 3.2.1. Proteinlerin Çöktürülmesi ............................................................................ 49 3.2.2. Proteinlerin IPG Şeritlere Yüklenmesi ........................................................ 49 3.2.3. Birinci Boyut-Proteinlerin İzoelektrik Noktalara Ayrılması ....................... 50 3.2.4. İkinci Boyut SDS-PAGE ............................................................................. 51 3.2.5. Jel Haritalaması ve Proteinlerin Jelden Uzaklaştırılması ............................ 54 3.2.6. Seçilen Proteinlerin Peptidlere Parçalanması .............................................. 55 3.2.7. Proteinlerin Tanımlanması .......................................................................... 56 3.2.8. Tanımlanan Proteinlerin Literatür ve Veribankası Aracılığıyla Kanserle İlişkilendirilmesi ........................................................................... 56 4. BULGULAR ............................................................................................................. 57 4.1. Proteomik Çalışmalar ......................................................................................... 57 4.1.1. Hücre Kültürü Çalışmaları…………………………………………………57 4.1.2. Numune Hazırlama ve Protein Miktar Tayini……………………………...57 4.1.3. 2-D Jel Elektroforez Şartlarının Optimizasyonu ......................................... 58 4.1.4. İmaj Analiz Çalışmaları ............................................................................... 58 5. TARTIŞMA ve SONUÇ ........................................................................................... 73 5.1. Proteomik Çalışmaları ve Optimizasyon Süreçleri ............................................ 73 5.2. Elektroforez Koşullarının Uygun Hale Getirilmesi ............................................ 82 5.3. İmaj Analiz Çalışmaları ve Değerlendirilmesi ................................................... 82 5.4. Proteinlerin Tanımlanması ................................................................................. 83 5.5. Proteomik Sonuçların Değerlendirilmesi ........................................................... 83tr_TR
dc.language.isoturtr_TR
dc.publisherFen Bilimleri Enstitüsütr_TR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesstr_TR
dc.subjectNanoteknolojitr_TR
dc.subjectNanotıptr_TR
dc.subjectSiklodekstrin nanopartikültr_TR
dc.subjectProteomiktr_TR
dc.subjectKaraciğer kanseritr_TR
dc.subjectHEPG-2 hücre hattıtr_TR
dc.subject2 boyutlu jel elektroforeztr_TR
dc.subjectKütle spektrometrisitr_TR
dc.subjectNanotechnologytr_ENG
dc.subjectNanomedicinetr_ENG
dc.subjectCyclodextrin nanoparticletr_ENG
dc.subjectProteomicstr_ENG
dc.subjectLiver cancertr_ENG
dc.subjectHEPG-2 cell linetr_ENG
dc.subject2D gel electrophoresistr_ENG
dc.subjectMass spectrometrytr_ENG
dc.subject.lcshKonu Başlıkları Listesi::Teknoloji. Mühendisliktr_TR
dc.titleSiklodekstrin Nanopartiküllerinin HEPG-2 Karaciğer Kanseri Hücre Hattı Üzerine Etkisinin Proteomik Çalışmalarla İncelenmesitr_TR
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesistr_TR
dc.description.ozetProteom; protein ve genom sözcüklerinin birleştirilmesinden türetilmiş, belli bir genom tarafından kodlanan proteinlerin tümünü işaret kapsayan bir sözcüktür. Proteom analizine proteomik denilmektedir. Bir organizma vücudunun farklı bölgelerinde, hücre döngüsünün farklı evrelerinde ve farklı çevre koşullarında farklı protein ekspresyonlarına sahiptir. Sabit bir yapı olan ve bir organizma için çok iyi tanımlanabilen genomun aksine, proteom, hücreden hücreye farklılık gösterir ve iç ve dış uyaranlara yanıt olarak biyokimyasal etkileşimler aracılığı ile sürekli bir değişim halindedir. Amfifilik siklodekstrinler kendi kendine nanopartikül oluşturabilme yeteneğine sahip moleküllerdir. Ayrıca; bu moleküllerin intrinsik olarak bazı kanser hücre hatları üzerinde apoptotik etki gösterdiği saptanmıştır. Göstermiş olduğu özellikler nedeniyle bu yapılar nano ölçekte ilaç taşıyıcı sistem olarak literatüre girmiştir. Bu tez çalışmasında, PBO kodlu amfifilik siklodekstrin nanopartikülün HEPG-2 karaciğer kanser hücreleri üzerindeki antikanser mekanizması karşılaştırmalı proteomik yaklaşımlarla tespit edilmiştir. ii Amfifilik siklodekstrin nanopartiküllerin etkisiyle çoğalmanın önlendiği kanser hücre hatları, işlem görmüş hücre hatları olarak kullanılmış ve T grubu olarak isimlendirilmiş olup; hiçbir şekilde işlem görmeden çoğalmanın önlenmediği grup ise kontrol grubu olarak kullanılmış olup C grubu olarak ifade edilmiştir. T ve C gruplarından elde edilmiş lizat çözeltisinden sitozolik fraksiyonlar elde edilmiştir. Proteomik çalışmalarda, 2 boyutlu jel elektroforez (2D jel elektroforez) ile ayrılan T ve C gruplarına ait proteinler için imaj analizi çalışmaları yapılmıştır. T ve C grupları için farklılaştığı tespit edilen proteinler Matriks Yardımlı Lazer İyonizasyon Kütle Spektrometrisi (MALDI-TOF/TOF-MS) ile analiz edilmiş ve tanımlanmıştır. Bu çalışma ile ilaç taşıyıcı sistem olarak kullanılan amfifilik siklodekstrin nanopartiküllerin tek başına da karaciğer kanseri üzerine etkili olduğu proteom düzeyindeki değişimlerle gösterilmiştir. Kanser tedavisinde amfifilik siklodekstrin nanopartiküllerin ilaç taşıyıcı sistem olarak kullanıldığı durumlarda, nanopartikülün kendisinin de hücre çoğalmasını baskılamada göstermiş olduğu etki göz ardı edilmemelidir sonucuna varılmıştır.tr_TR
dc.contributor.departmentNanoteknoloji ve Nanotıptr_TR
dc.embargo.termsAcik erisimtr_TR
dc.embargo.lift2019-10-21T12:27:56Z


Bu öğenin dosyaları:

Bu öğe aşağıdaki koleksiyon(lar)da görünmektedir.

Basit öğe kaydını göster