dc.contributor.advisor | Kocaefe, Çetin | tr_TR |
dc.contributor.author | Sharafi, Parisa | tr_TR |
dc.date.accessioned | 2015-10-14T10:44:57Z | |
dc.date.available | 2015-10-14T10:44:57Z | |
dc.date.issued | 2013 | tr_TR |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11655/1018 | |
dc.description.abstract | This study postulates that the
extracellular transport of the secretory proteins of the adipocytes (adipokines) can be
utilized to achieve recombinant protein expression. Adipokines are exported outside
of the adipocytes by the help of leader sequences which deduce the extracellular
export traffic. It is aimed to achieve the expression of a recombinant protein
extracellularly by using the leader sequences of the 7 selected adipokines. This
approach will aid in production and extracellular secretion of the protein of interest
by mature adipocytes. The efficiency and intracellular- extracellular follow-up of
these export signals will be done by fusing these export signals to N- terminal of
Green Fluorescence Protein (GFP). The S/MAR sequences increase the episomal
persistence of the transgenic vector where it is located to and prolong its expression
in mammalian cells. In this study, it is aimed to use this property of S/MAR
sequences by adding it to the vector construct to increase the episomal expression of
the transgenes in mature adipocytes (non-dividing cells). It is proposed to compare
the efficacy of two different S/MARs in this study, the S/MAR sequences of
Apolipoprotein B (APO-B) and Interferon B (IFN-B) genes. The efficiency of this
designed recombinant gene expression construct will be shown by expressing the
dominant-negative form of myostatin (MSTNdn), as a model of gene of interest, in
adipocytes and observing its effect on myoblast cells. As a result of this study, export
signal of Retinol Binding Protein (RBP4) has been selected as the most efficient
export signal. No differences have been observed between the selected S/MAR
sequences. At the end of this study, the in vitro efficiency of the designed vector
construct containing selected export signal (RBP4), S/MAR sequences, and MSTNdn
was shown by implementing the secretion of this model recombinant protein from
the transfected mature adipocytes. | tr_TR |
dc.language.iso | tur | tr_TR |
dc.publisher | Sağlık Bilimleri Enstitüsü | tr_TR |
dc.subject | Fat tissues | tr_TR |
dc.title | Olgun Yağ Hücrelerinin Rekombinant Protein Ifade Kapasitelerinin İncelenmesi | tr_TR |
dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | tr_TR |
dc.callno | 2013/750 | tr_TR |
dc.contributor.departmentold | Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı | tr_TR |
dc.description.ozet | Olgun yağ hücreleri, çok sayıda
adipokin ve sitokin salgılayan, protein yapımı yönünden zengin hücrelerdir. Tez
kapsamında, yağ hücrelerinin protein salgı mekanizmasının rekombinant protein
ifadesi ve salgısı amacıyla kullanım imkanlarının araştırılması amaçlanmıştır. İlk
olarak, yağ hücrelerine özgü hücre içi salgısal proteinlere ait 7 farklı adipokinin
sinyal dizilerinin salgı etkinliği bakımından karşılaştırılması yapılmıştır. Bu
karşılaştırma, yeşil floresan protein (GFP) bildirici geninin bu öncü sinyal dizilerinin
“N” terminaline füzyon ile ekleyip hücre içi ve dışında takibi gerçekleşmiştir.
Farklılaşmış, olgun yağ hücreleri G1 evresinde olup bölünmemektedir. Bu nedenle
aktarılan vektörlerin gen ifade sürecinin bölünen hücrelere göre daha kalıcı olması
beklenmektedir. Ancak, gen ifadesinin koruması ve ifade süresinin daha da
uzatabilmesi amacıyla hazırlanan vektörlere scaffold/matrix bağlanma bölgesi
(S/MAR) dizilerinin eklenmesi hedeflenmiştir. Bu amaçla, İnterferon beta (IFNβ) ve
Apolipoprotein B (APOB) genlerinin S/MAR dizileri, hazırlanan vektöre
yerleştirilerek bildirici gen ifadesi sürecinin takibi yapılmış olunup en uzun süre gen
ifadesi sağlayan S/MAR dizisi karşılaştırmalı olarak ortaya konmuştur. Olgun yağ
hücrelerinde rekombinant gen ekspresyonu ve salgısını sağlayan yaklaşımın
etkinliğinin dominant-negatif etkili miyostatin (MSTNdn) aracılığı ile hücre
kültüründe gösterilmesi amaçlanmıştır. Bu çalışma sonucunda en etkin öncü dizisi
olarak Retinol bağlama proteini (RBP4) genine ait öncü dizisi seçilmiştir. S/MAR
dizileri arasında bir fark görünmemiştir. Çalışmanın son basamağında yukarıda
sıralanan deneysel yaklaşımlarla belirlenen en uygun salgı sinyali (RBP4), S/MAR
dizisi ve MSTNdn içeren vektör omurgasının etkinliğinin gösterilebilmesi amacıyla
olgun yağ hücrelerince salgısı sağlanarak etkinliği in vitro deneylerle gösterilmiştir. | tr_TR |